一、

用于咽喉反流性疾病无创诊断的胃蛋白酶检测试剂盒和试纸条的研制和临床应用研究

• 项目简介

咽喉反流性疾病是耳鼻咽喉头颈外科一些疾病的源头病因，与慢性喉炎、声带息肉、喉接触性肉芽肿等喉部疾患关系密切，占耳鼻喉科门诊量的5%左右，是一个庞大的群体。其主要依据患者症状和喉镜检查的反流症状指数量表和反流体征评分量表、24小时喉咽部pH监测和胃蛋白酶试剂盒进行诊断。量表诊断缺乏特异性，准确度差；24小时喉咽部pH监测属于有创检查，不易被患者接受；目前应用的胃蛋白酶试剂盒检测唾液中胃蛋白酶诊断咽喉反流，虽然是无创检查，但其是传统的酶联免疫技术，灵敏度较差，且每天患者咽喉反流次数有限，唾液中的胃蛋白酶含量相对较低，只有在咽喉反流后一段时间内的唾液中才能监测到，漏诊率高。所以目前迫切需要灵敏度高的试剂或患者可以每天自己多次监测的试纸条。

申请人曾在制定咽喉反流性疾病诊断量表的美国PeterBelafsky教授的嗓音和吞咽障碍诊疗中心进行了有关咽喉反流性疾病诊断和治疗的专项研究，是国内研究咽喉反流性疾病最早的学者，在临床诊治了1000例以上咽喉反流性疾病患者，有着丰富的临床治疗经验，并且其所在科室多次在国内举办咽喉反流性疾病诊疗学习班，推动了咽喉反流性疾病在国内的广泛开展，同时在国内较早开展了24小时双探头阻抗pH监测，该诊断咽喉反流性疾病的金标准的应用，是检验拟研制试剂盒和试纸条的灵敏性、特异性、阳性预测值和阴性预测值的必备条件。申请人也推动了该疾病在国内的临床研究，发表了大量临床诊断和治疗的相关研究文章。

本课题选择用化学发光酶联免疫技术检测病人唾液中的胃蛋白酶，不会引起病人的不适感，而且可以实现对唾液中胃蛋白酶的定量分析，便于对病人病情的把握。并且本课题采用了化学发光技术，较传统的酶联免疫技术可提高10-100倍的灵敏度，有效防止漏检率。目前国内外均没有采用化学发光酶联免疫技术检测胃蛋白酶的相关技术。与此同时本课题拟采用测流免疫层析试纸条技术检测病人唾液中的胃蛋白酶，该技术简单快速，而且不需要专业仪器设备和专业操作人员，病人可自行完成。另外考虑到测流免疫层析技术的灵敏度要低于酶联免疫技术，因此本课题采用了双纳米金颗粒增强技术，该技术通过采用金标抗体二次捕获大颗粒纳米金的策略，使其灵敏度与酶联免疫技术相当，方便应用于临床诊断，受益于患者，因此本研究具有很好的创新性和应用价值。

• 项目研发成果及表现形式

研发成果：

a.建立胃蛋白酶化学发光酶联免疫检测技术和胃蛋白酶检测免疫层析试纸条技术，用于咽喉反流性疾病的诊断；b.申请1-2项国家专利；c.发表研究论文1-2篇。

技术方案：

（1）针对人胃蛋白酶的单克隆抗体的制备。制备针对人胃蛋白酶的单克隆抗体，使其能够特异识别人胃蛋白酶，用于诊断试剂的研究。（2）化学发光酶联免疫试剂盒的研制。采用双抗体夹心策略，将一种单克隆抗体包被化学发光板，辣根过氧化物酶标记另一种单克隆抗体，配合化学发光技术，结合不同浓度的对照品，即可实现对咽喉反流病人唾液中胃蛋白酶的定量分析。（3）测流免疫层析试纸条的研制。将一种单克隆抗体标记纳米金颗粒，将另一种单克隆抗体包被于检测线，羊抗鼠IgG包被于质控线，组装测流免疫层析试纸条，结合双纳米金颗粒增强信号的方式提高试纸条的灵敏度，即可实现随时随地检测。（4）对检测试剂盒和试剂条进行临床评估。试剂盒与试纸条的检测结果与诊断咽喉反流性疾病的金标准24小时pH监测结果对比，分别计算试剂盒和试纸条检测胃蛋白酶的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值，判定试剂盒与试纸条的临床应用价值。

• 项目市场前景和效益分析

本项目所采用的单克隆技术、化学发光酶联免疫检测技术和测流免疫层析技术均已较为成熟，胃蛋白酶新型检测技术为国内外首次提出，所用临床样本为患者唾液，不涉及医学伦理问题。胃蛋白酶化学发光酶联免疫检测技术和胃蛋白酶检测免疫层析试纸条技术的建立，将极大提高我国咽喉反流病人的无创诊断，同时咽喉反流性疾病是我国常见病多发病，占耳鼻咽喉科门诊病人的5%，估计全国咽喉反流性疾病患者年门诊量至少在300万以上，该研制产品预计商品价格以80元计算，如用该产品进行无创诊断及疗效评估，年市场价值超过3.0亿元，同时可以推向国际市场，具有巨大市场潜力和产业化前景。

• 知识产权情况 

本项目的知识产权是自主研发，截止到目前，已申请专利2项。

• 合作意向和合作方式

合作开发/技术入股

二、

肺炎支原体及耐药肺炎支原体核酸诊断试剂的研发及转化

• 项目简介

肺炎支原体（MycoplasmaPneumoniae, MP）是儿童及青少年社区获得性肺炎的重要病原体，约占10%-40%。近年来发病率上升，呈现低龄化。儿童首选治疗药物大环内酯类耐药报道逐年增加，难治重症病例渐多，严重危害儿童和青少年健康。目前MP实验室诊断方法不规范，缺乏早期、快速的耐药MP的诊断方法，导致临床对MP感染及耐药MP感染的认知、应对措施严重不足。

本课题组前期已经开展了一系列MP及耐药MP诊断方法的研究：90年代率先建立了肺炎支原体快速实验室诊断方法并应用于临床诊断，获得北京市科委颁发的高新技术产品证书,该研究获得直接经济效益达100万元左右；2014年核酸诊断MP的方法已经授权发明专利并成功转化。本项目拟在前期研究的基础上进一步优化实验条件，研发和健全应用分子诊断和核酸诊断技术诊断MP和耐药MP感染；建立统一、规范的MP与耐药MP实验室诊断方法；完成上述诊断方法的专利申请，配合相关企业完成注册。实验室诊断技术的研发和转化对临床指导抗生素的合理选择，降低耐药率将起到重大的作用，同时会带来良好的社会效益和经济效益。

• 项目研发成果及表现形式

1.申请专利：申请应用分子生物学方法诊断肺炎支原体和耐药肺炎支原体的发明专利。

2．产品注册证等：上述诊断技术研发成功，申请专利后，配合相关企业完成诊断技术的商业转化。

3．技术方案：完成应用分子诊断技术对MP和耐药MP感染的方法学建立和临床价值评估，使其在临床工作中得到应用并以培训的方式进行推广。

• 项目市场前景和效益分析

肺炎支原体感染发病率的逐年上升，低龄化趋势，全球耐药率的不断攀升，难治重症病例的逐年渐多，严重危害儿童和青少年健康。

目前MP实验室诊断方法不规范，缺乏早期、快速的耐药MP的诊断方法。

肺炎支原体感染的诊断：国内目前有市售的荧光定量PCR检测MP的试剂盒，但该试剂盒因使用了Taqman探针，增加了试剂盒的成本，而且缺乏临床诊断价值的评估，使其临床推广受到了阻碍。本项目研发的诊断试剂快速、敏感特异性高、操作简单、设备要求低、成本低廉、适合各级别医疗单位应用，具有很好的应用前景和经济社会效益。 

耐药肺炎支原体感染的诊断：国内目前还没有关于耐药MP检测的分子诊断试剂。本项目中研发的耐药肺炎支原体检测方法专利申请已经受理。耐药MP分子诊断试剂的研发、推广普及对临床指导抗生素的合理选择，降低耐药率将起到重大的作用，同时会带来良好的社会效益和经济效益。

• 知识产权情况 

本项目为自主研发项目，不存在知识产权问题。截止到目前，肺炎支原体及耐药肺炎支原体核酸诊断试剂的研发及转化项目拥有有效专利申请1项，其中发明专利1项，预计申请专利4项。

• 合作意向和合作方式

1.技术一次性转让；2、技术授权/许可；3.合作开发/技术入股。

三、

肝细胞癌手术切缘肿瘤干细胞检测试剂盒的研发及在预后判断中的应用

• 项目简介

肝癌是全球位列第五位的高发恶性肿瘤，其死亡率高居恶性肿瘤第二位，是我国发病率、致死率均高、严重威胁人类健康的重大疾病。手术后复发转移是肝癌病人预后差的重要因素之，而手术切缘残癌的存在可能是肝癌复发的关键因素，因此如何灵敏、快速、有效进行肝癌手术患者切缘残癌的检测，以对肝癌术后复发转移进行精确预测，从而进行精准个体化医疗是应对肝癌这一严重威胁我国人民生命健康亟待解决的关键科学问题。

我们前期工作发现，肝细胞癌手术切缘组织中α2δ1阳性肝癌干细胞可能是肝癌复发的起源细胞，其存在是肝细胞癌病人术后复发和总生存期短的独立危险因素。针对这一类细胞的抗体1B50-1可以清除肝癌干细胞从而在肝癌治疗中有潜在应用前景。本课题拟研制手术切缘组织中α2δ1阳性肝癌干细胞检测的试剂盒，建立相关诊断的技术方法和标准，探讨在肝细胞癌癌预后判断中的应用价值，为开展规范化的临床实验以应用于指导个体化的精确医疗提供依据。该类肝癌干细胞是我国独立自主发现，相关标志物和在肝癌预后判断应用价值和作为治疗靶点均是国际上首次报道，拥有独立自主知识产权（已申请美国、欧盟、中国、巴西、印度、日本和韩国等国家专利）。该研究如能成功实施，对于肝细胞癌术后预后判别、指导个体化医疗具有重要的临床应用价值，同时对于发展具有我国自主知识产权的肿瘤诊断新产品和技术具有战略性意义，为未来靶向肿瘤干细胞药物应用的临床应用奠定基础。

• 项目研发成果及表现形式

1.专利（发明专利）； 2、产品注册证等；3、提供技术方案。

• 项目市场前景和效益分析

肝癌发病率高，每年估计新发病例70多万例，我国则占总数的55％以上。其死亡率高居恶性肿瘤的第二位，虽然手术切除为患者带来治愈的希望，但术后2年高达50%的复发风险对患者生命是严重的威胁。因此对于这些病人进行筛选，给予恰当的治疗，是个体化精确医疗行为的要求，对肝细胞癌手术患者的治疗可以有的放矢。对那些预后好，避免过度治疗，节省开支，避免浪费，保护机体正常细胞，社会效益显著。

针对肿瘤干细胞的药物被认为是治愈肿瘤的希望所在，因此在研究新的药物同时，配套的个体敏感性预测检测试剂是必须的。1B50-1抗体的药物研发正在进行中（已完成人源化改造和初步体外药效学评价），其不但可以用于肝癌，而且对肺癌、胰腺癌等肿瘤亦有效，将来在临床实验和应用中，该检测试剂盒是必须的配套检测试剂，因此所研制的检测试剂市场前景广阔，有望带来可观的经济效益。

• 知识产权情况 

本项目为自主研发课题，拥有独立的自主知识产权，已申请中国、欧盟、美国、日本、韩国、巴西和印度的专利。预计再申请专利1项。

• 合作意向和合作方式

1、技术授权/许可；2、合作开发/技术入股。

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